Resumen La leishmaniasis tegumentaria en el estado Trujillo es una enfermedad endémica. Actualmente existe una alta incidencia, de 120 a 130 casos nuevos/año, procedentes de distintos sectores en la entidad, afectando a todos los grupos etários. Una herramienta utilizada para su diagnóstico es el test de Montenegro o "leishmanina", que permite evidenciar la exposición al parásito causante de esta enfermedad, protozoo del género Leishmania, subgénero Viannia, que puede generar respuestas diferentes en el paciente ante un antígeno preparado como base de la leishmanina. Nos propusimos hacer la revisión de la técnica empleada en el diagnóstico de la leishmaniasis por medio de la intradermorreacción (IDR), estandarizar la técnica de preparación y la aplicación de un antígeno, elaborado con cepas locales de Leishmania sp. La toma de muestras en individuos afectados de la ciudad y consultantes del consultorio del Centro de Investigaciones Parasitológicas "José Witremundo Torrealba", facilitó el aislamiento de los parásitos, su identificación y uso en la preparación del antígeno, que se ensayó en una población del área endémica, para evaluar su calidad y la cinética de su reacción. Encontramos que la concentración del antígeno que induce una respuesta estable fue 40mg/ml de proteína para un tiempo de lectura de 48 horas. El test de Duncan confirma la bondad de estos resultados. La amplia utilización de antígenos, como herramienta de valor epidemiológico, hace necesario el empleo de antígenos estandarizados, por lo que ofrecemos nuestro antígeno para pruebas de campo en amplia escala.

Abstract In the state of Trujillo, Venezuela, tegumentary leishmaniasis is an endemic disease. Currently, there exists an incidence of 120 to 130 new cases per year, originating in different sectors of the community of 493,000 inhabitants and affecting all social groups. A tool used in its diagnosis is the "leishmanina", or Montenegro test, which makes evident the exposure to the parasite which causes the disease, the protozoos of the genus Leishmania, sub-genus Viannia, which can generate different responses in the patient, before treatment with prepared anti-genes, such as those which form the base of leishmanina. We propose to revise the technique used in the diagnosis of Leishmaniasis by means of intra-dermatological-reaction (IDR) and to standardize the preparation and application technique of an anti-gene made from local types of Leishmania sp. The taking of samples from effected individuals of the city, attending the Treatment Center of the Parasitological Research Centre, ´´Jose Witremundo Torrealba´´, facilitated the isolation of the parasites, their identification and their use in the preparation of the anti-gene. The latter was tested on the population of an endemic region, comparing its characteristics with those of other similar anti-genes, in order to evaluate its quality and the process of its reaction. We found that the concentration of anti-gene, which induced a stable response, was 40ug/ml of protein for a trial period of 48 hours. A local monovalent anti-gene (L. viannia brasiliensis) induced a better response than another polyvalent anti-gene (L. brasiensis brasiliensis and L. brasiliensis guyanensis) in order to produce a hyper-reaction resistant to allergic tests. The Duncan Test confirmed the validity of these results. The widespread utilization of anti-genes as a valuable epidemiological tool makes the employment of standardized anti-genes necessary and we, consequently, offer our anti-gene for large-scale field trials.

Under experimental conditions, the developmental pattern of Leishmania garnhami in its vector Lutzomyia townsendi, was established following daily dissections between the 1st and the 12th day post-infection. L. garnhami succeeded in establishing initial infections in any of the gut regions and in the Malpighian tubules of infected sandflies. Similar behavior was observed in infected Lu. longipalpis. The distribution of L. garnhami in the digestive tract of infected flies, is different to that observed in species of the L. mexicana and L. braziliensis complexes. The susceptibility of Lu. townsendi to infection by L. mexicana, L. braziliensis and L. garnhami is discussed. It is concluded that L. garnhami, according to its behaviour in the vector, must be considered different from the l. mexicana complex, and that its developmental pattern differs from that of the Suprapylaria, because it invades the hind triangle and also from the species of the Peripylaria by its invasion of the Malpighian tubules.

Bajo condiciones experimentales, se estabelece el de desarrollo primario de Leishmania garnhami em su vector Lutzomyia townsendi, siguiendo disecciones diarias entre el Iro y 12mo dia post-imnfección. Se demuestra que L. garnhami puede lograr el estabelecimiento inicial de la infección en cualquiera de las regiones del intestino y en los túbulos de Malpighi del insecto vector. Un comportamiento similar fue observado en ejemplares de Lu. longipalpis. Se discute la susceptibilidad de Lu. townsendi a las infecciones por L. mexicana, L. braziliensis y L. garnhami. Se concluye que L. garnhami, a juzgar por su comportamiento en el vector, debe considerarse distinta a las especies del complejo L.mexicana y que su patrón de desarrollo difiere del de las especies de la Sección Suprapylaria, ya que invaden el triângulo pilórico, y del de la Peripylaria por su invasión a los túbulos de Malpighi.

Morphometric studies on amastigotes of eigtheen populations from four isolates of two species of Venezuelan Leishmania (L. braziliensis and L. garnhami) indicate that the position of the kinetoplast is not significantly modified when parasites are submitted to pasages into hamsters, and culture in NNN medium or infection in a vector (Lu. townsendi). The location of the kinetoplast measured as the distance from the posterior end of the amastigote to the kinetoplast divided by the distance of the same organoid to the anterior end of the amastigote allows to differenciate L. braziliensis from L. mexicana and L. garnhami. Other morphometric parameters are not so confiable.

Estudios morfométricos sobre los amastigotos de dieciocho poblaciones de cuatro aislados pertenecientes a dos especies venezolanas de Leishmania (L. braziliensis y L. garnhami) indican que la posición del einetoplasto nose modifica en modo estadísticamente significativo cuando los parásitos son sometidos a pasajes por hamsteres y ratones,cultivos en medio NNN o por infección en un vector (Lu. townsendi). La posición del cinetoplasto, medido como la distancia entre el extremo posterior del amastigoto al cinetoplasto, dividido entre la distancia del organoide al extremo anterior de la célula, permite diferenciar a L. braziliensis de L. mexicana y L. garnhami. Los otros parámetros morfométricos no son tan confiables.

Presumptive and confirmative techniques for searching mammals which could be reservoirs for Leishmania parasites from man are described. The changes of immobilising and agglutinating titers for promastigotes from culture by sera from normal and exposed mammals after single or repeated intradermal inoculation of promastigotes are described. A fall in titers of agglunation is observed in sera from hamsters, Holochilus venezuelae and Didelphis marsupialis after inoculation with L. mexicana mexicana from Panama and L. garnhami from the Venezuelan Andes region. The nature of this phenomenon is discussed. Xenodiagnoses were made with Lutzomyia townsendi on Holochilus venezuelae and Sigmodon hispidus experimentally infected with L. mexicana mexicana, L. mexicana amazonensis, L. braziliensis and L. garnhami. The tests were read by means of microscope examination of stained faeces excreted by sandflies between 108 to 132 hours after feeding on infected animals. Positive results were obtained in 23% of experiments using mammals with localized lesions, allowing sandflies to feed freely on anesthetized animals with one to several localized lesions.

Se describen dos técnicas, presuntiva y confirmativa, para la investigación de mamíferos que pudieran ser reservorios de Leishmania que parasitan al hombre. Se investigan los cambios en los títulos de inmovilización y aglutinación de promastigotos de cultivo por los sueros de animales normales y expuestos una o varias veces a la inoculación intradérmica de pequeñas dosis de promastigotos vivos. Se registra una caída de los títulos de aglutinación en los sueros de hamsteres, de Holochilus venezuelae y de Didelphis marsupialis después de la inoculación con L. mexicana mexicana de Panamá y de L. gamhami de la región de los Andes venezolanos. Se discute la natureza de estos fenómenos. Se han hecho xenodiagnósticos con Lutzomyia townsendi en Holochilus venezuelae y Sigmodon hispidus infectados experimentalmente com L. mexicana mexicana, L. mexicana amazonensis, L. braziliensis y L. garnhami. Las pruebas fueron leidas mediante el examen microscópico de las gotitas de heces excretadas entre las 108 y 132 horas después de la ingesta infectante, tras colorearlas con Giemsa. Se obtuvieron resultados positivos en 23% de los experimentos usando mamíferos con lesiones localizadas, dejando a los flebótomos ingurgitarse libremente sobre animales anestesiados que poseian una hasta varias lesiones localizadas.

The susceptibility of Lutzomyia townsendi to infection with amastigotes of Leishmania spp. from experimental lesions in hamsters is studied. A good correlation is found when the number of infected sandflies are compared with the distribution and density of parasites in the dermis, taking into account the size of the fascicle, particularly the length of labrun and dental depth in maxillae. Considerations are made on the susceptibilities of some anthropophilic sandflies from America that are considered as good vectors.

Se estudia la susceptibilidad de Lutzomyia townsendi a la infección con Leishmania spp. sobre lesiones experimentales de hamsteres. Se estudia la frecuencia y distribución de los amastigotos en la dermis, relacionándola con la profundidad que alcanza el estilete bucal del insecto. Una correlación positiva, con significante coeficiente de correlación, se establece entre la frecuencia de los parásitos a una profundidad de 100-150 nm en la dermis y el éxito de la infección de los flebótomos.

By means of morphometric parameters of amastigote stage and the type of development in a susceptible sandfly, four isolates of the so called Leishmania mexicanapifanoi are compared with one of L. mexicana mexicana and other of L. braziliensis. The results indicate that those isolates from diffuse chronic cutaneous lesions show a very close similarity with L. mexicana mexicana and suggest that the name L. mexicana pifanoi seems no to be tenable. These isolates may belong instead to L. mexicana amazonensis.

Utilizando parámetros biométricos de la fase amastigota y el tipo de desarrollo de los parásitos en el flebótomo Lutzomyia townsendi, se han estudiado cuatro aislados de Leishmania obtenidos de pacientes con leishmaniasis cutánea difusa, comparándolos con otros aislados de L. mexicana mexicana y L. braziliensis. Los resultados muestran una estrecha semejanza entre los cuatro aislados de pcientes anérgicos y la L. mexicana mexicana y sugieren que el nombre de L. mexicana pifanoi no parece sostenible; los cuatro aislados, por el contrario, podrían identificarse como L. mexicana amazonensis.